Dosage de l'activité de l'Intégrase du HIV-1

Mesure quantitative de l'action inhibitrice de drogues sur l'activité enzymatique de l'intégrase du VIH-1 : une réaction colorimétrique simple, reproductible, spécifique et sûre !

Ce kit de dosage de l'activité de l'Intégrase du VIH-1 est utilisé pour mesurer quantitativement l'action inihibitrice de drogues sur l'activité enzymatique de l'intégrase du VIH-1.

Principe du Test

Un oligonucléotide substrat double-brin "HIV-1 LTR U5" biotinylé est déposé dans des cupules de plaques 96 puits coatés avec de la streptavidine. L'intégrase recombinante du VIH-1 (fournie dans le kit) est hybridée sur cet oligonucléotide en présence des drogues à évaluer. Un second oligonucléotide double-brin "cible", portant une modification à son extrémité 3', est ensuite incubé dans chaque puits.

L'intégrase du VIH-1 clive les deux bases terminales de l'extrémité 3' exposée de l'oligonucléotide substrat et catalyse une réaction de transfert de brin pour liguer la séquence "substrat" à l'oligonucléotide "cible". Les produits de réaction sont incubés en présence d'un anticorps secondaire, couplé à la HRP et dirigé contre la modification de l'extrémité 3' de la séquence cible, La révélation est réalisée par  réaction colorimétrique. Des azides de sodium (inclus dans le coffret) sont utilisés comme contrôle positif de l'inhibition de l'activité enzymatique de l'intégrase du VIH-1.

Simple, reproductible, spécifique et sûr !

Simplicité !

• Pas de système reposant sur des cultures cellulaires
• Pas de production et de normalisation virale

Plus reproductible et spécifique de l’intégrase

• Reproductibilité : meilleure reproductibilité des résultats (mesures de CI₅₀ et CI₉₀), par rapport à ceux obtenus lors d'expérimentations reposant sur des systèmes cellulaires
• Pas de facteurs de variations, comme la toxicité cellulaire, la confluence du tapis cellulaire ou encore le nombre de passages de la culture.
• Spécifique de l’intégrase : ciblage des inhibiteurs agissant sur l’activité enzymatique

Des analyses en toute sécurité !

• Pas de manipulation directe du virus
• Le test peut être réalisé directement sur la paillasse